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曠場、高架十字迷宮、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)對后代腦發(fā)育影響及機(jī)制研究
點(diǎn)擊次數(shù):1788 更新時(shí)間:2020-04-10

目的:母體甲狀腺功能減退影響后代腦發(fā)育過程中神經(jīng)元的迀移、分化、 樹突和軸突的生長,以及突觸形成和髓鞘形成。后代表現(xiàn)為智力發(fā)育不良,語 言記憶能力下降,嚴(yán)重者出現(xiàn)呆小癥。上世紀(jì)六十年代,人們普遍認(rèn)為甲狀腺 激素(TH)不能夠通過胎盤,對甲狀腺激素影響腦發(fā)育的相關(guān)研究主要集中在 出生后階段。隨著優(yōu)生優(yōu)育需求的提高,醫(yī)學(xué)篩查手段,生物分子技術(shù)的進(jìn)展, 發(fā)現(xiàn)胎兒在宮內(nèi)甲狀腺未發(fā)育*且甲功未建立之前,腦組織中已經(jīng)有甲狀腺 激素受體的表達(dá)且體內(nèi)能夠檢測到一定量的甲狀腺激素。這說明妊娠期間母體 甲狀腺激素能夠通過胎盤屏障到達(dá)胎兒體內(nèi)。胎兒甲狀腺功能建立之前,母體 甲狀腺激素的缺乏也能夠?qū)е绿撼錾笾橇ο陆怠?/p>

哺乳動物腦發(fā)育按照一定的時(shí)間和空間次序進(jìn)行,且甲狀腺激素的調(diào)節(jié)作 用具有時(shí)間和空間特異性。即甲狀腺激素對不同組織和不同細(xì)胞存在不同的作 用,而且對于同一組織或細(xì)胞在不同階段的調(diào)節(jié)作用也不盡相同。腦發(fā)育不同 階段母體甲狀腺激素缺乏對后代神經(jīng)精神發(fā)育的影響是否存在差異仍不清楚。

圍產(chǎn)期甲狀腺激素過量能夠?qū)е潞蟠纳窠?jīng)元分化加速。妊娠期間特異的 應(yīng)激狀態(tài),容易發(fā)生妊娠一過性甲狀腺毒癥,研究發(fā)現(xiàn)妊娠一過性毒癥對妊娠 結(jié)局有影響。其對后代神經(jīng)發(fā)育是否有影響暫無相關(guān)報(bào)道。

甲狀腺激素通過核受體途徑調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄,影響神經(jīng)元發(fā)育相關(guān)因子表 達(dá)。其能夠與多種核受體形成異源二聚體,招募轉(zhuǎn)錄激活或轉(zhuǎn)錄抑制因子發(fā)揮 不同的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。研宄者針對甲狀腺激素靶基因進(jìn)行了多次篩選,研宄多 集中在后代出生后。但腦發(fā)育早期母體甲狀腺激素缺乏所導(dǎo)致的后代腦組織基 因表達(dá)譜改變相關(guān)研究現(xiàn)在仍存在空白。

本研究建立腦發(fā)育不同階段母體甲狀腺激素缺乏模型,探究腦發(fā)育不同階 段甲狀腺激素缺乏對后代神經(jīng)精神發(fā)育影響的差異。探究腦發(fā)育早期母體甲狀 腺激素過量和缺乏對后代的精神神經(jīng)發(fā)育影響,并進(jìn)行相關(guān)機(jī)制研究。對腦發(fā) 育早期甲狀腺激素靶基因進(jìn)行篩選,為甲狀腺激素影響后代早期腦發(fā)育的機(jī)制 提供新線索。

研宄方法:

第1部分:

采用0. 025%甲巰咪唑(麗1)飲水和1. 5噸/100g體重每天左旋甲狀腺素(L-T4) 連續(xù)三天皮下注射建立妊娠第10 (GD10)-第17天(GD17)(相當(dāng)于人類腦發(fā) 育第1階段)、GD17-仔鼠出生當(dāng)天(PM)0)(相當(dāng)于人類腦發(fā)育第二階段)、

和PND0 —出生后10天(PND10)(相當(dāng)于人類腦發(fā)育第三階段)母體甲狀腺激 素缺乏孕鼠模型,正常對照組給予正常飲水,等體積生理鹽水皮下注射,每組 15只。

分別在各組預(yù)期的模型建立時(shí)間和激素補(bǔ)充的第二天進(jìn)行眶后靜脈采血, ELISA法測定孕鼠血清中總甲狀腺素(TT4)和促甲狀腺激素(TSH)含量,驗(yàn)證模型 建立情況。

仔鼠PND10進(jìn)行心尖取血,ELISA法檢測仔鼠血清總甲狀腺素(TT4)和促甲 狀腺激素(TSH)含量。分離大腦皮層,勻漿后ELISA法檢測腦組織中TT4含量。

仔鼠PND10進(jìn)行翻正反射和觸須引發(fā)的前肢放置實(shí)驗(yàn),檢測后代軀體感覺 和運(yùn)動皮層功能。進(jìn)行長時(shí)程增強(qiáng)實(shí)驗(yàn),檢測后代海馬CA1-CA3區(qū)突觸可塑性 和突觸傳遞性。

仔鼠成年P(guān)ND40開始依次進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn),高架十字迷宮,零迷宮,旋轉(zhuǎn)加 速實(shí)驗(yàn),水迷宮,強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn),檢測后代活動度、焦慮抑郁傾向、運(yùn)動能力 和學(xué)習(xí)記憶能力。

結(jié)論:

腦發(fā)育不同階段母體甲狀腺激素缺乏不同程度地影響后代神經(jīng)精神發(fā)育。

腦發(fā)育早期母體甲狀腺激素缺乏和過量影響仔鼠成年時(shí)期海馬和皮層相關(guān) 的學(xué)習(xí)記憶能力、導(dǎo)致仔鼠成年時(shí)期軸突發(fā)育異常。

腦發(fā)育早期母體甲狀腺激素可能通過影響GTPase家族相關(guān)因子以及相關(guān)神 經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)導(dǎo)向因子表達(dá),影響后代腦發(fā)育過程中的神經(jīng)迀移和軸突發(fā) 育過程。

腦發(fā)育早期母體甲狀腺激素缺乏導(dǎo)致了仔鼠GD17大腦皮層基因差異表達(dá)和 形態(tài)發(fā)育延緩。

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